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ELISA試劑盒細(xì)胞裂解液和組織勻漿液的細(xì)節(jié)處理

日期:2025-04-29 01:38
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摘要:ELISA試劑盒細(xì)胞裂解液和組織勻漿液的細(xì)節(jié)處理因?yàn)槊该釫LISA試劑盒只能查看可溶性蛋白的含量,所以應(yīng)保證一切樣本均為澄清的液體,沉積或懸浮物都應(yīng)離心 去掉。為了保證查看的準(zhǔn)確性,保存于-20℃或-80℃的樣本*好在1~6個(gè)月內(nèi)查看;4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行查看。別的,還應(yīng)保證樣本不含NaN3,因?yàn)镹aN3會按捺HRP的活性,然后致使假陰性的成果。

ELISA試劑盒細(xì)胞裂解液和組織勻漿液的細(xì)節(jié)處理

因?yàn)槊该釫LISA試劑盒只能查看可溶性蛋白的含量,所以應(yīng)保證一切樣本均為澄清的液體,沉積或懸浮物都應(yīng)離心
去掉。為了保證查看的準(zhǔn)確性,保存于-20℃或-80℃的樣本*好在1~6個(gè)月內(nèi)查看;4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)
行查看。別的,還應(yīng)保證樣本不含NaN3,因?yàn)镹aN3會按捺HRP的活性,然后致使假陰性的成果。  
一、ELISA試劑盒細(xì)胞裂解液的細(xì)節(jié)處理:  
1. 吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用胰酶消化細(xì)胞,加恰當(dāng)培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省掉。  
2. 收集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。  
3. 參與恰當(dāng)?shù)念A(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前參與蛋白酶按捺劑)重懸細(xì)胞。一般6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需求150~
250μL PBS重懸。  
4. 將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫凍住樣品,重復(fù)凍融幾回,使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)
行超聲破碎,以抵達(dá)裂解的目的。  
5. 4℃10000×g離心10min,除掉細(xì)胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免重復(fù)凍融。 
二、酶免ELISA試劑盒組織勻漿液的細(xì)節(jié)處理:
1. 將組織樣本用PBS(0.01M, PH 7.4)沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
2. 將組織塊稱重,記載后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充分
3. 將組織按必定的比例參與預(yù)冷的PBS(臨用前參與蛋白酶按捺劑)勻漿,勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。
4. 羅致勻漿液到離心管,4℃5000×g離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免重復(fù)凍融。

滬公網(wǎng)安備 31011702004399號

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